脑片细胞内标记问答

你好，你说的protocol在哪啊？没有见到，药品柜的面板上也没有。我看到DAB试剂盒上的介绍是用什么一抗，二抗，标记，再显色。我们的实验中没有一抗二抗什么的。我的想发是这样，就是，首先把生物素（biocytin)加在我配制的细胞内液里面，然后，实验中用电极吸住细胞形成封接，再加上一些电脉冲，使加了生物素的胞内液进入细胞体中，这样，细胞就被生物素标记上，这样应该算胞内标记吧。最后，试验后把脑片取出，甲醛固定，再用SABC（StreptAvidin－Biotin Complex）处理，最后用DAB试剂盒显色。(我们的DAB试剂盒是从武汉博士德公司买的,不是自己配的.
我现在不清楚我们做的步骤是不是行的通??这样做是否合理? 正确的原理的步骤是什么?
我的目的就是在脑片中标记出神经元,包括胞体,树轴突,这样我就可以知道我所记录的细胞是什么类型的细胞,以及细胞位于什么层次位置.你认为还有什么染色方法可以采用比较好呢? 盼望指点!谢谢!

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用biolytic标记神经细胞，很容易，不必着急。按照protocol做，就可以。注意不要为了节约，每个well里不要放多了切片；如是大白鼠，只放1－2张，若是小白鼠2－3张。

其它一切按方法来。

你是细胞外标记还是细胞内标记？

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1 你可能用30天以下的动物做脑片。这是细胞内标记。

2 当你把电极吸住细胞后，应做patchclamp，然后biocytin (8%)会衣扩散，从高浓度的电极到细胞里，通常 hold细胞30min.

3 当你hold 细胞后，通过 monitor 膜电位确定是否完成pathclamp.

4 你也可以先做细胞外，试验你的显色方法。就是用压力的方法，把大量电极溶液注入slice. 30 min 后放回incubtor让slice多存活一段时间（ more than 4hrs）,再用4%多聚甲醛固定2 hrs.

5 包埋和切 slice千万小心，因为你记录和标记的细胞在 slice 表面。

6 你用ABC 对biocytin显色，跳过一抗、二抗，你需要去看有关的原理的书籍。注意A和 B液配好30 min后方可用。你可以方便地到Vector 公司的网站上找到最新的protocol.或用google搜索。